摘要：本研究旨在克隆水牛SIRT 6基因,構(gòu)建真核表達(dá)載體,并對該基因進(jìn)行生物信息學(xué)及組織表達(dá)譜分析。以牛SIRT 6基因編碼區(qū)為種子序列(GenBank登錄號:NM_001098084.1),應(yīng)用Oligo 7.0軟件設(shè)計引物序列,用RT-PCR方法擴(kuò)增水牛SIRT 6基因完整編碼區(qū)序列,測序鑒定后進(jìn)行生物信息學(xué)分析,構(gòu)建逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pMXs-SIRT6-IRES-GFP,并在HEK-293T細(xì)胞和水牛胎兒成纖維細(xì)胞上進(jìn)行重組載體表達(dá)鑒定;采集水牛心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腸、腦、皮膚、生殖嵴分別提取RNA,反轉(zhuǎn)錄后以cDNA為模板進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR,檢測SIRT 6基因在各組織中的表達(dá)差異。結(jié)果表明,水牛SIRT 6基因編碼區(qū)全長1 080 bp,編碼359個氨基酸,其中亮氨酸及脯氨酸含量最高(10.3%),酪氨酸含量最低(1.1%)。水牛SIRT 6基因核苷酸序列與牛、人和小鼠的同源性分別為98.4%、86.7%和78.5%,物種間同源性較低。系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果表明,水牛與牛聚為一支,再與人、小鼠聚為一大支,親緣關(guān)系相對較近,與果蠅親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。SIRT6蛋白理論分子質(zhì)量為39.47 ku,分子式為C 1737 H 2783 N 509 O 516 S 13,等電點(diǎn)為8.48,不存在跨膜區(qū),為膜內(nèi)蛋白;含有Sirtuin家族特有的Sir2去乙酰化酶的催化結(jié)構(gòu)。二級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果顯示,水牛SIRT6蛋白包含13個α-螺旋、27個β-折疊、24個T-轉(zhuǎn)角和20個無規(guī)則卷曲。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)的SIRT 6基因能在HEK-293T細(xì)胞和水牛胎兒成纖維細(xì)胞中表達(dá)。實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果顯示,SIRT 6基因在水牛心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腸、腦、皮膚、生殖嵴中均有表達(dá),其中在生殖嵴中表達(dá)量最高,在皮膚中的表達(dá)量次之,而在肝臟中表達(dá)量最低。本試驗(yàn)結(jié)果將為水牛SIRT 6基因的功能研究提供參考。