綿羊痘病毒甘肅古浪株RING finger基因的克隆表達(dá)及序列分析

陳曉倩; 吳國華; 郭小臘; 楊靜; 吳金恩; 顏魯軍; 周雪雁; 鄭亞東; 陳軼霞西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院; 甘肅蘭州730030; 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所; 家畜疫病病原生物學(xué)國家重點實驗室; 甘肅省動物寄生蟲病重點實驗室; 甘肅蘭州730046

綿羊痘病毒
ring
finger蛋白
序列分析
原核表達(dá)

摘要：【目的】對綿羊痘病毒甘肅古浪株RING finger蛋白的基因進(jìn)行克隆,表達(dá)以及序列分析,初步探究綿羊痘病毒RING finger蛋白是否具有E3泛素連接酶活性,為闡明其在綿羊痘病毒感染過程中對泛素蛋白酶體系統(tǒng)的調(diào)控作用奠定基礎(chǔ).【方法】以綿羊痘病毒甘肅古浪株DNA為模板,通過PCR擴(kuò)增 RING finger 基因.利用Pfam數(shù)據(jù)庫、DNAstar等軟件進(jìn)行序列及遺傳進(jìn)化分析;將 RING finger 基因片段插入原核表達(dá)載體pGEX-4T-1中,構(gòu)建pGEX-SPPVRFP重組表達(dá)載體,在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá),并進(jìn)行SDS-PAGA和Western-blot分析.【結(jié)果】綿羊痘病毒 RING finger 基因由723個核苷酸組成,編碼的240個氨基酸的分子量約為28.5 ku,具有RING finger結(jié)構(gòu)域.不同羊痘病毒株間 RING finger 基因核苷酸序列同源性高達(dá)99.2%,氨基酸序列同源性高達(dá)98.3%.不同的RING finger蛋白都含有8個保守的半胱氨酸和組氨酸.SDS-PAGA分析顯示,重組SPPVRFP大小約為55 ku,Western-blot分析顯示,重組SPPVRFP不能與綿羊痘病毒陽性血清反應(yīng).【結(jié)論】成功克隆、表達(dá)并純化了綿羊痘病毒 RING finger 基因,對SPPV GS-GL株RING-finger蛋白進(jìn)行序列分析,推測其可能具有E3泛素連接酶活性.

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