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朱砂葉螨幾丁質(zhì)酶TecCht1基因的原核表達與純化
李博; 洪鵬; 沈宏亮; 楊金; 卜春亞 北京農(nóng)學院生物科學與工程學院/農(nóng)業(yè)部華北都市農(nóng)業(yè)重點實驗室; 北京102206
- 朱砂葉螨
- 幾丁質(zhì)酶
- 原核表達
- 純化
摘要：【目的】朱砂葉螨是世界范圍廣泛分布的重要經(jīng)濟害螨,害螨防治十分困難.而幾丁質(zhì)酶是昆蟲體內(nèi)幾丁質(zhì)代謝中分解幾丁質(zhì)的關(guān)鍵酶,在更替新舊表皮和降解圍食膜中起著重要的作用,幾丁質(zhì)酶是潛在的螨害生物防治靶標.本研究對朱砂葉螨幾丁質(zhì)酶TecCht1進行原核表達和純化.【方法】克隆朱砂葉螨TecCht1基因的催化結(jié)構(gòu)域,連接到pColdⅡ載體上,構(gòu)建pColdⅡ/TecCht1重組表達載體,在大腸桿菌中進行高效表達,采用鎳柱純化目的蛋白,并進行Western Blot檢測.【結(jié)果】TecCht1在pColdⅡ載體上成功高水平表達,確定最佳誘導表達時間為24h.對TecCht1進行大量表達和純化,經(jīng)Western Blot驗證,獲得純度較高的目的蛋白.【結(jié)論】實現(xiàn)TecCht1體外高效原核表達,獲得大量的TecCht1重組蛋白.
- 朱砂葉螨
- 幾丁質(zhì)酶
- 原核表達
- 純化
摘要：【目的】朱砂葉螨是世界范圍廣泛分布的重要經(jīng)濟害螨,害螨防治十分困難.而幾丁質(zhì)酶是昆蟲體內(nèi)幾丁質(zhì)代謝中分解幾丁質(zhì)的關(guān)鍵酶,在更替新舊表皮和降解圍食膜中起著重要的作用,幾丁質(zhì)酶是潛在的螨害生物防治靶標.本研究對朱砂葉螨幾丁質(zhì)酶TecCht1進行原核表達和純化.【方法】克隆朱砂葉螨TecCht1基因的催化結(jié)構(gòu)域,連接到pColdⅡ載體上,構(gòu)建pColdⅡ/TecCht1重組表達載體,在大腸桿菌中進行高效表達,采用鎳柱純化目的蛋白,并進行Western Blot檢測.【結(jié)果】TecCht1在pColdⅡ載體上成功高水平表達,確定最佳誘導表達時間為24h.對TecCht1進行大量表達和純化,經(jīng)Western Blot驗證,獲得純度較高的目的蛋白.【結(jié)論】實現(xiàn)TecCht1體外高效原核表達,獲得大量的TecCht1重組蛋白.
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北京農(nóng)學院學報
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主管單位：北京市教育委員會;主辦單位：北京農(nóng)學院
